Retatrutide(połączyć:https://www.bloomtechz.com/synthetic-chemical/peptide/retatrutide-powder-cas-2381089-83-2.html) to chemicznie syntetyzowany, długo działający agonista polipeptydu GLP-1R/GIPR/GCGR, przeznaczony do leczenia cukrzycy typu 2 u dorosłych, kontroli masy ciała i niealkoholowego stłuszczenia wątroby/niealkoholowego stłuszczeniowego zapalenia wątroby. Wskazanie tego produktu w leczeniu cukrzycy typu 2 u dorosłych zostało dopuszczone do stosowania klinicznego w dniu 29 sierpnia 2023 roku. Ponadto na etapie końcowej oceny znajduje się wniosek o rejestrację kliniczną wskazań w niealkoholowym stłuszczeniu wątroby/niealkoholowym stłuszczeniowym zapaleniu wątroby. Na świecie opracowywanych jest ośmiu agonistów GLP-1R/GIPR/GCGR, z których najszybszy postęp osiągnął Retatrutide Rity i w czerwcu tego roku rozpoczął się trzeci etap badania klinicznego. W tym samym miesiącu Rita ogłosiła, że na dorocznym spotkaniu ADA opublikowano dane z badań drugiej fazy dotyczące retatrutydu, z których wynika, że po 24 tygodniach retatrutyd (1 mg, 4 mg, 8 mg lub 12 mg) osiągnął główny punkt końcowy skuteczności ocena dla osób otyłych lub z nadwagą, bez cukrzycy, ze średnią utratą masy ciała wynoszącą 17,5%. Wśród drugorzędowych punktów końcowych na koniec 48 tygodni leczenia uzyskano średnią utratę masy ciała wynoszącą 24,2%. W oparciu o opublikowaną metodę zsyntetyzowaliśmy również peptyd w laboratorium. Konkretna metoda syntezy zostanie krótko opisana, a szczegółowe etapy można przesłać nam e-mailem.
Metoda 1:
Szczegółowe etapy syntezy retarutydu przy użyciu syntezy w stanie stałym w laboratorium są następujące:
Przygotuj wymagane odczynniki i instrumenty: w tym aminokwasy, dichlorometan, węglan potasu, etoksylowany żel krzemionkowy, acetonitryl, pirydyna, N-metylomorfolina, źródło chlorku diizopropyloetylu, kwas trifluorooctowy, DIPEA, aminokwasy zabezpieczone Boc i inne odczynniki, a także mieszadła magnetyczne , wyparki obrotowe i inne instrumenty.
(1) Synteza aminokwasów zabezpieczonych Boc: Rozpuścić wymagane aminokwasy w dichlorometanie, dodać proszek węglanu potasu, równomiernie wymieszać, dodać etoksylowany żel krzemionkowy, kontynuować mieszanie, a następnie dodać pirydynę i N-metylomorfolinę, aby otrzymać aminokwasy zabezpieczone Boc.
(2) Synteza w fazie stałej: Zmieszać acetonitryl, źródło chlorku diizopropyloetylu i kwas trifluorooctowy, równomiernie wymieszać, dodać przygotowane aminokwasy zabezpieczone Boc i kontynuować mieszanie, aby otrzymać produkt syntezy w fazie stałej.
(3) Grupa odbezpieczająca: Rozpuścić syntezę w fazie stałej w dichlorometanie, dodać kwas trifluorooctowy, równomiernie wymieszać, a następnie dodać DIPEA. Kontynuuj mieszanie, aby uzyskać syntezę odbezpieczonej fazy stałej.
(4) Oczyszczanie: Rozpuścić odbezpieczoną syntezę na fazie stałej w wodzie, ustawić pH na około 9,0 za pomocą roztworu wodorotlenku sodu, następnie ustawić pH na około 5,0 za pomocą kwasu octowego i na koniec wytrącić czysty produkt za pomocą eteru.
Metoda 2:
Szczegółowe etapy syntezy retarutydu przy użyciu syntezy w fazie ciekłej w laboratorium są następujące:
Przygotuj wymagane odczynniki i instrumenty: w tym argininę, glicynę, bezwodnik octowy, trietyloaminę, węglan potasu, dichlorometan, metanol, pirydynę, N-metylomorfolinę, bezwodnik octowy, octan sodu i inne odczynniki, a także instrumenty takie jak mieszadła, rozdzielacze, pompy próżniowe, piece i kolumny chromatograficzne.
(1) Rozpuścić argininę i glicynę w odpowiedniej ilości dichlorometanu, dodać odpowiednią ilość bezwodnika octowego i trietyloaminy i równomiernie wymieszać pod mieszadłem.
(2) Przenieść rozpuszczoną mieszaninę do pieca i ogrzewać ją w temperaturze 80 stopni C przez 1 godzinę w celu acetylowania reszt aminokwasowych.
(3) Zobojętnić przereagowany roztwór sproszkowanym węglanem potasu w celu zneutralizowania kwasu octowego w roztworze z wytworzeniem octanu sodu, a następnie ekstrahować wytworzony peptyd dichlorometanem.
(4) Przemyć wyekstrahowany roztwór peptydu metanolem i przesączyć za pomocą pompy próżniowej w celu otrzymania surowego peptydu.
(5) Surowy peptyd rozpuścić w odpowiedniej ilości pirydyny i N-metylomorfoliny, dodać odpowiednią ilość bezwodnika octowego i octanu sodu i równomiernie wymieszać pod mieszadłem.
(5) Przesączyć przereagowany roztwór za pomocą pompy próżniowej, przemyć placek filtracyjny metanolem, a następnie przesączyć za pomocą pompy próżniowej w celu otrzymania końcowego Restarutide.
Metoda 3:
Szczegółowe etapy syntezy retarutydu metodami chemicznymi w laboratorium są następujące:
Przygotuj wymagane odczynniki i instrumenty: w tym argininę, glicynę, bezwodnik octowy, trietyloaminę, węglan potasu, dichlorometan, metanol, pirydynę, N-metylomorfolinę, bezwodnik octowy, octan sodu i inne odczynniki, a także instrumenty takie jak mieszadła, rozdzielacze, pompy próżniowe, piece i kolumny chromatograficzne.
(1) Rozpuścić argininę i glicynę w odpowiedniej ilości dichlorometanu, dodać odpowiednią ilość bezwodnika octowego i trietyloaminy i równomiernie wymieszać pod mieszadłem.
(2) Przenieść rozpuszczoną mieszaninę do pieca i ogrzewać ją w temperaturze 80 stopni C przez 1 godzinę w celu acetylowania reszt aminokwasowych.
(3) Zobojętnić przereagowany roztwór sproszkowanym węglanem potasu w celu zneutralizowania kwasu octowego w roztworze z wytworzeniem octanu sodu, a następnie ekstrahować wytworzony peptyd dichlorometanem.
(4) Przemyć wyekstrahowany roztwór peptydu metanolem i przesączyć za pomocą pompy próżniowej w celu otrzymania surowego peptydu.
(5) Surowy peptyd rozpuścić w odpowiedniej ilości pirydyny i N-metylomorfoliny, dodać odpowiednią ilość bezwodnika octowego i octanu sodu i równomiernie wymieszać pod mieszadłem.
(6) Przesączyć przereagowany roztwór za pomocą pompy próżniowej, przemyć placek filtracyjny metanolem, a następnie przesączyć za pomocą pompy próżniowej w celu otrzymania końcowego Restarutide.
Aby otrzymać cząsteczkę docelową, wymaganych jest wiele reakcji syntezy organicznej. Ponadto w tej metodzie wykorzystuje się wiele odczynników organicznych i złożone warunki operacyjne, dlatego synteza chemiczna rotarutydu w laboratorium zwykle nie jest odpowiednia do produkcji na dużą skalę lub zastosowań przemysłowych. W przypadku produkcji na dużą skalę lub zastosowań przemysłowych, częściej stosowaną metodą jest przygotowanie rotarutydu metodami syntezy, takimi jak biosynteza lub synteza w fazie ciekłej, które są stosunkowo małe w skali laboratoryjnej, stosunkowo proste w obsłudze i odpowiednie do przygotowania małych ilości produktów . Retarutyd otrzymany tymi metodami ma podobną lub podobną strukturę i aktywność biologiczną do retarutydu syntetyzowanego metodami chemicznymi, ale ma zalety w postaci wyższej wydajności i łatwiejszego przygotowania. Jednocześnie mają większy potencjał uprzemysłowienia i szersze perspektywy zastosowań.
Metoda 4:
Szczegółowe etapy syntezy retarutydu metodami biologicznymi w laboratorium są następujące:
Przygotowanie wymaganych genów i odczynników: Uzyskaj plazmidy zawierające gen Retatrutide z biblioteki genów, transformuj plazmidy komórkami biorców (takimi jak Escherichia coli) i uzyskaj bakterie inżynieryjne zawierające gen Retatrutide.
(1) Hodowla bakterii inżynieryjnych: W odpowiednich warunkach temperatury, pH i stężenia jonów należy użyć pożywki hodowlanej do hodowli bakterii inżynieryjnych, umożliwiając im namnażanie się w dużych ilościach.
(2) Ekstrakcja Retarutide: Hodowane bakterie inżynieryjne rozdrabnia się przy użyciu kruszarki, a fragmenty komórek oddziela się od Retarutide przy użyciu metod takich jak ultrafiltracja i sedymentacja w celu otrzymania surowego produktu.
(3) Oczyszczanie retarutydu: Surowy retarutyd oczyszcza się przy użyciu technologii chromatograficznej w celu otrzymania retarutydu o wysokiej czystości.
Wykrywanie i identyfikacja rotarutydu: Do wykrywania i identyfikacji struktury oczyszczonego rotarutydu należy zastosować wysokosprawną chromatografię cieczową, spektrometrię mas, jądrowy rezonans magnetyczny i inne techniki.
Równanie reakcji chemicznej syntezy biologicznej retarutydu w laboratorium obejmuje głównie reakcje chemiczne występujące podczas procesu ekspresji genów, obejmujące dwa etapy: transkrypcję i translację.
Transkrypcja: dwuniciowy DNA otwiera się, wykorzystując jedną nić jako matrycę do syntezy nici RNA, co wymaga zaangażowania polimerazy RNA. Równanie reakcji jest następujące:
Dwuniciowy DNA: DNApol → mRNA+DNApol
Tłumaczenie: Rybosomy wiążą się z mRNA w celu syntezy łańcuchów peptydowych, w procesie wymagającym udziału aminokwasów i energii. Równanie reakcji jest następujące:
Rybosom+mRNA → Łańcuch peptydowy+PKB+Pi+H2O
Łańcuch peptydowy+ATP → Łańcuch peptydowy+AMP+PPi
Wśród nich DNApol reprezentuje polimerazę DNA; MRNA oznacza informacyjny RNA; Rybosomy reprezentują rybosomy; Łańcuchy peptydowe reprezentują łańcuchy polipeptydowe; PKB oznacza difosforan guanozyny; Pi oznacza nieorganiczny kwas fosforowy; H2O oznacza wodę; ATP oznacza trifosforan adenozyny; AMP oznacza monofosforan adenozyny; PPi oznacza nieorganiczny pirofosforan. W wyniku tych reakcji powstają łańcuchy peptydowe wymagane do syntezy retarutydu, które są następnie przetwarzane i modyfikowane w późniejszych etapach w celu otrzymania retarutydu.
Powyższe są powszechnymi metodami syntezy rotarutydu w laboratorium, każda z nich ma inne zalety, wady i zakres zastosowania. Laboratorium zazwyczaj wykorzystuje metody syntezy w fazie ciekłej i syntezy w fazie stałej do produkcji na małą skalę do celów badawczych i eksperymentalnych; Z drugiej strony produkcja przemysłowa wykorzystuje kombinację biosyntezy i produkcji w fazie ciekłej/stałej do produkcji na dużą skalę, aby zaspokoić popyt rynkowy. Należy zauważyć, że metody te wymagają ścisłej optymalizacji warunków i kontroli procesu, aby zapewnić jakość i czystość produktu końcowego.