Proszek agarozowyjest substancją organiczną o wzorze chemicznym c24h38o19. Jest to biała lub żółta cząstka żelowa lub proszek przypominająca kulkę, która jest liniowym polimerem, a podstawowa struktura to 1,3-połączona - D-galaktoza i 1,4-połączona 3,6-endoetero-l-galaktoza, które są naprzemiennie połączone.
Pektyna agarowa jest niejednorodną mieszaniną złożoną z wielu mniejszych cząsteczek. Agarozę na ogół podgrzewa się do temperatury powyżej 90 stopni, aby rozpuścić się w wodzie, a gdy temperatura spada do 35-40 stopni, tworzy dobry półstały żel, co jest główną cechą i podstawą jej różnych zastosowań. Działanie żelu agarozowego zwykle wyraża się siłą żelu. Im wyższa siła, tym lepsze działanie żelu.
Proszek agarozowy, w skrócie Ag, jest nienaładowanym, obojętnym składnikiem agaru, tłumaczonym również jako agaroza lub agaroza. Struktura chemiczna agarozy jest połączona przez 1,3 - D-galaktozę i 1,4-połączoną 3,6-endoetero-l-galaktozę, które są naprzemiennie połączone.
Agaroza pochodzi z polisacharydu czerwonych alg, a jej głównym składnikiem jest poligalaktoza, z czego około 70% to agaroza, a 30% to agaroza o rozgałęzionych łańcuchach. Agaroza ma strukturę liniową i jest przepuszczana przez D-galaktozę i 3,6-odwodnioną galaktozę - 1, 4 i - 1, 3 złącza na przemian tworzą powtarzające się jednostki disacharydowe. Agarozę o rozgałęzionych łańcuchach ekstrahowano z - 1, 3 wiązania oddzielają kolejny łańcuch. Materiał wyekstrahowany z wodorostów gorącą wodą zawiera około 40% agaru. Dostępny w handlu agar (powszechnie znany jako agar) często ma kształt arkusza lub luźnej liny i jest zwykle stosowany jako jadalna guma, środek do pakowania leków lub pożywka do hodowli bakterii. Czysta agaroza jest często stosowana w laboratoriach biochemicznych jako półstały nośnik w elektroforezie, chromatografii i innych technologiach rozdzielania i analizy makrocząsteczek biologicznych lub małych cząsteczek.
Proces produkcji agarozy można podzielić na cztery części: obróbka wstępna, ekstrakcja, obróbka celulozą DEAE i odwodnienie
1) Wstępnie obrobione surowce proszkowe suszy się bezpośrednio w temperaturze 80°C przez 1/2 godziny. surowce z taśm i bloków myje się wodą, kroi na małe kawałki i zapieka
2) Ekstrakcja: po mieszaniu i ekstrakcji mieszanym roztworem estrów octanu sodu i kwasu octowego przez kilka godzin, usunąć wodę przez odsysanie, przemyć, następnie wymieszać i ekstrahować roztworem buforowym wodorowęglanu sodu węglanem sodu przez kilka godzin, a następnie przepompować, przesączyć i przemyć wodą
3) Żel agarowy wyekstrahowany roztworem buforowym rozpuszcza się w 4% roztworze przez ogrzewanie wodą, a następnie dodaje celulozę DEAE i miesza przez 3-4 godziny w warunkach utrzymywania ciepła, a następnie odwirowuje. Przesącz zbiera się i filtruje, otrzymując biały roztwór w stanie koloidalnym
4) Odwodnienie: po podgrzaniu białego przesączu, mieszając, szybko dodać 95% etanol, aż do momentu, gdy nie będzie widocznego wytrącania się osadu, ochłodzić do temperatury pokojowej, wylać roztwór z górnej warstwy, przemyć i wysuszyć osad, aby otrzymać produkt z wydajnością 71%
Odzysk odczynnika Odzysk celulozy DEAE: po odwirowaniu osad gotuje się z wodą, przesącza przez jedwabną tkaninę o oczkach 100, powtarza się kilka razy do uzyskania klarownego filtratu, następnie przemywa 0,5mol/1 HCl, 0,5mol/1 NaOH i wodą i suszy. Stopień odzysku wynosi 95%. Frakcję o temperaturze 80°C zebrano przez bezpośrednią destylację etanolowego roztworu wodnego odzyskanego z wodnego roztworu Yichun. Następnie dodaje się stały chlorek sodu do nasycenia i kontynuuj destylację.. 70% można załadować. Po odparowaniu chlorku sodu znajdującego się w butelce można go także napełnić za pomocą zaworu.
Proszek agarozowyto polisacharyd ekstrahowany z wodorostów i jest głównym składnikiem agaru. Od momentu odkrycia jest szeroko stosowany w wielu dziedzinach ze względu na swoje unikalne właściwości fizyczne i chemiczne, takie jak zdolność do tworzenia żelu, stabilność termiczna, stabilność chemiczna i biokompatybilność. Poniżej znajduje się szczegółowe wyjaśnienie jego przeznaczenia:
Elektroforeza w żelu agarozowym jest jedną z najczęściej stosowanych technik separacji i analizy w biologii molekularnej. Jako medium do elektroforezy żelowej agaroza ma zalety dużego rozmiaru porów, szerokiego zakresu separacji i prostej obsługi. W procesie elektroforezy makrocząsteczki biologiczne takie jak DNA, RNA czy białko migrują przez pory żelu agarozowego pod wpływem pola elektrycznego. Ze względu na różnice w ładunku, wielkości i kształcie różnych cząsteczek, ich prędkość migracji w żelu jest różna, co prowadzi do separacji. Elektroforeza w żelu agarozowym jest szeroko stosowana w klonowaniu genów, analizie ekspresji genów i wykrywaniu mutacji genów. Jest powszechnie stosowany jako nośnik lub matryca w hodowli komórkowej. Ze względu na doskonałą biokompatybilność i stabilność chemiczną, agaroza może zapewnić stabilne środowisko wzrostu dla komórek. Na przykład w eksperymencie z tworzeniem kolonii na miękkim agarze agaroza służy do przygotowania pół-stałego podłoża hodowlanego w celu wykrycia zdolności komórek do tworzenia kolonii, co ma ogromne znaczenie dla oceny stopnia złośliwej transformacji komórek.
Ponadto agarozę można również łączyć z innymi biomateriałami w celu przygotowania kompozytowych materiałów na rusztowania do zastosowania w inżynierii tkankowej i medycynie regeneracyjnej. Żel agarozowy odgrywa również ważną rolę w immunodyfuzji i immunoelektroforezie. W tych technologiach żel agarozowy, jako medium reakcji antygenu i przeciwciała, może tworzyć wyraźne linie lub pierścienie precypitacyjne, które można wykorzystać do wykrywania i analizy obecności i stężenia antygenu lub przeciwciała. Rozmiar porów i właściwości ładunku żelu agarozowego mogą wpływać na szybkość dyfuzji i skuteczność wiązania antygenu i przeciwciała, dlatego warunki eksperymentalne można zoptymalizować, dostosowując stężenie i rodzaj agarozy.
Zastosowanie w eksperymentach z zakresu biologii molekularnej
Elektroforezę w żelu agarozowym można zastosować nie tylko do rozdzielenia DNA i RNA, ale także połączyć ją z innymi technologiami w celu ich oczyszczenia. Na przykład w procesie ekstrakcji DNA można zastosować elektroforezę w żelu agarozowym w celu wykrycia integralności i czystości DNA, a następnie docelowy segment DNA można oddzielić od żelu poprzez cięcie w żelu i odzyskiwanie. Zaletą tej metody jest łatwa obsługa i wysoki współczynnik odzysku. W eksperymentach z hybrydyzacją kwasów nukleinowych żel agarozowy można zastosować jako nośnik w fazie stałej do utrwalenia sond DNA lub RNA na żelu, a następnie hybrydyzować ze znakowanym docelowym kwasem nukleinowym. Wykrywając obecność i intensywność sygnałów hybrydyzacji, można określić obecność i stężenie docelowych kwasów nukleinowych.
Rozmiar porów i właściwości ładunku żelu agarozowego mogą wpływać na skuteczność wiązania sondy i docelowego kwasu nukleinowego, zatem warunki hybrydyzacji można zoptymalizować poprzez dostosowanie stężenia i rodzaju agarozy. Reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR) jest jedną z najczęściej stosowanych technik w biologii molekularnej do amplifikacji DNA. W analizie produktów PCR jedną z najczęściej stosowanych metod jest elektroforeza w żelu agarozowym. Rozdzielając produkty PCR za pomocą elektroforezy, można wykryć wielkość i czystość zamplifikowanych fragmentów, określając w ten sposób, czy reakcja PCR przebiegła pomyślnie i czy występują-niespecyficzne problemy z amplifikacją.
Chociaż wielkość porów żelu agarozowego jest stosunkowo duża, nie nadaje się on do rozdzielania białek drobnocząsteczkowych, ale w niektórych przypadkach nadal można go stosować do oddzielania i oczyszczania białek. Na przykład w preparatywnej elektroforezie żelowej żel agarozowy można zastosować do rozdzielenia i oczyszczenia białek o większych masach cząsteczkowych. Ponadto agarozę można również łączyć z innymi materiałami w celu przygotowania żelu kompozytowego, aby rozszerzyć zakres separacji i poprawić skuteczność separacji. W niektórych eksperymentach określania aktywności enzymu, jako nośnik do unieruchomienia enzymu można zastosować żel agarozowy. Immobilizacja enzymu na żelu agarozowym może utrzymać aktywność i stabilność enzymu oraz ułatwić oddzielanie i odzyskiwanie enzymu z reagentów. Metoda ta ma szerokie zastosowanie w inżynierii enzymatycznej.
Zastosowanie w mikrobiologii
Agaroza jest powszechnie stosowana jako koagulant w pożywkach do hodowli drobnoustrojów. W porównaniu z agarem agaroza ma wyższą czystość i niższą zawartość zanieczyszczeń, dzięki czemu jest bardziej odpowiednia do hodowli drobnoustrojów. Przygotowując stałą pożywkę hodowlaną, rozpuść agarozę w gorącej wodzie, następnie dodaj inne składniki odżywcze i antybiotyki i ostudź, aby utworzyć stałą pożywkę hodowlaną. Ten typ podłoża hodowlanego może zapewnić stabilne środowisko wzrostu dla mikroorganizmów, ułatwiając ich izolację, oczyszczanie i identyfikację. W eksperymentach identyfikacji mikrobiologicznej żel agarozowy może być użyty do przygotowania specyficznych pożywek identyfikacyjnych. Na przykład podczas identyfikacji bakterii jelitowych można zastosować pożywkę agarozową zawierającą określone cukry w celu rozróżnienia różnych typów bakterii poprzez obserwację ich fermentacji cukrów. Ponadto żel agarozowy można również stosować do przygotowania biochemicznych pożywek reakcyjnych dla mikroorganizmów w celu wykrycia ich charakterystyki metabolicznej i aktywności enzymatycznej.
Proszek agarozowyjest zazwyczaj podgrzewany do temperatury powyżej 90 stopni w celu rozpuszczenia się w wodzie, a gdy temperatura spada do 35-40 stopni, tworzy dobry półstały żel, co jest główną cechą i podstawą jego różnych zastosowań. Działanie żelu agarozowego zwykle wyraża się siłą żelu. Im wyższa siła, tym lepsze działanie żelu. Żel agarozowy powstaje w wyniku istnienia wiązań wodorowych. Każdy czynnik, który może zniszczyć wiązania wodorowe, może doprowadzić do zniszczenia żelu. Agaroza jest hydrofilowa i prawie całkowicie pozbawiona grup naładowanych. Rzadko powoduje denaturację i adsorpcję wrażliwych makrocząsteczek biologicznych. Jest idealnym, obojętnym nośnikiem. W procesie przygotowania agarozy konieczne jest jak największe usunięcie pektyny agarowej, w przeciwnym razie może pojawić się bardzo mała ilość siarczanu i kwasu pirogronowego w celu zastąpienia grupy jonizującej w agarozie, co spowoduje elektroosmozę (EEO) i wpłynie na ruch cząstek. Zawartość siarczanów w agarozie dobrej jakości jest stosunkowo niska, zwykle poniżej 0,2%, a elektroosmoza jest stosunkowo niewielka, zwykle poniżej 0,13. Dlatego agaroza jest tak droga niż agar.
W 1937 r. Araki po raz pierwszy oddzielił agarozę od agaru, ale dopiero w 1961 r. hjertin po raz pierwszy odkrył doskonałe działanie agarozy, która przyciągała coraz więcej uwagi i rozpoczęła produkcję przemysłową. Agaroza jest szeroko stosowana w badaniach klinicznych, analizach biochemicznych i separacji biomakromolekuł.
Proszek agarozowy jest podstawowym narzędziem w biologii molekularnej i biotechnologii, o szerokim zakresie zastosowań w elektroforezie żelowej, chromatografii powinowactwa, immunodyfuzji i immunoelektroforezie. Jego unikalne właściwości, takie jak łatwość użycia, wszechstronność, niska toksyczność i{1}}efektywność, sprawiają, że jest on niezbędnym elementem badań laboratoryjnych. Pomimo ograniczeń, takich jak ograniczona rozdzielczość i kruchość, ostatnie postępy w technologii żelu agarozowego, w tym żele-o wysokiej rozdzielczości, żele-odlewane wstępnie i urządzenia mikroprzepływowe-na bazie agarozy, zwiększyły jego użyteczność i poprawiły wydajność. W miarę postępu badań naukowych proszek agarozowy niewątpliwie pozostanie cennym i niezbędnym odczynnikiem w zestawie narzędzi biologii molekularnej i biotechnologii.
Popularne Tagi: proszek agarozowy cas 9012-36-6, dostawcy, producenci, fabryki, hurtownia, zakup, cena, luzem, na sprzedaż